前30 min分别在10、20、30 min，之后分别在1、2、4、6、8、12、24 h取上清液测定污染物。

对该菌的培养基和发酵条件进行优化，最终将该菌摇瓶发酵后粗酶液酶活从2.050U/mL提高到6.179U/mL，提高了三倍。从图6--b和图6-c可看出，在魔芋粉和酵母浸粉添加量固定不变的情况下，产酶活力随着硫酸锰添加量的增加先上升后开始下降。

结合实际操作便利，将培养基添加量改为:魔芋粉3.00%、酵母浸粉2.70%、硫酸锰0.45%，在此条件下进行三次验证实验，测得酶活力平均值为6.179U/mL，与理论值的相对误差很小，说明本实验采用响应面法对培养基成分进行回归分析，达到了参数优化的目的。国内外对该菌的研究较少，鉴于其对环境污染的治理与对植物的促生长作用及产各种酶，因此该菌在未来还是有不错的研究及应用前景。（2）响应曲面图分析三因素之间的响应曲面见图6，从中可以看出三者之间有明显的交互作用。本研究得到的路德维希肠杆菌从目前的实验来看产酶活力不高且耐酸性不强，可通过诱变、改变代谢流等手段提高其产酶活力和耐酸性。三、结论与讨论以甘露聚糖为唯一碳源，从魔芋种植土壤中筛得一株产耐酸性-甘露聚糖酶的菌株，所产酶在pH4酸性缓冲液中处理一小时后酶活力仅降低13%。

从以上分析可有，该模型与实际试验拟合良好，试验误差小，证明本实验采用响应面法优化培养基是可行的。从图6-a和图6-c可以看出，在魔芋粉和硫酸锰添加量固定的情况下，酶活力随着酵母浸粉添加量的增加先上升后开始下降。故在确定流动相比例V(二氯甲烷(工业))∶V(甲醇)∶V(水)=42∶9∶1及上样量11.4g的基础上，考察了5个洗脱流速(480，530，580，630，680mL/min)对纽莫康定B0制备的影响，结果如表4所示。

随着流速的增加，柱压逐渐增加，而实验所用150mm高压制备系统工作压力为0～7MPa。收集B0的HPLC色谱纯度95%的制备液。随着进样次数的增加，柱压会逐渐增高，再生柱子会越频繁，如此会占用一定的工时和消耗再生溶剂，增加生产成本。以线性原则放大到中试150mm制备柱(Cs-prep150工业制备色谱系统，汉邦科技)，流量调整为630mL/min。

2.3.2上样量的优化上样量在色谱制备中影响着目的峰的分离度及制备效率。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：二氯甲烷，氯仿，纽莫康定。

由表4知：洗脱流速越大，柱压越高，峰型越窄。最终得到的冻干粉质量分别为4.71，4.70，4.72，4.73，4.72g，其各数值相差很小。纽莫康定B0的色谱纯度值和纽莫康定C0的色谱纯度值是经过面积归一化法得到的。保留时间越长，生产成本越大。

3种冻干粉B0质量分数分别为95.73%，95.77%，95.63%，相差不大以纽莫康定B0对照品进行外标法定量。相比于中低压色谱制备，高压色谱制备效率高、柱效高。纽莫康定B0粗品，鲁南新时代生物技术有限公司提供，质量分数81.20%;纽莫康定B0对照品，大同市矿区风华生物科技有限公司，质量分数95.56%，批号16001;纽莫康定C0对照品，大同市矿区风华生物科技有限公司赠与，质量分数95.11%，批号16002;乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

改性硅胶，苏州纳微科技股份有限公司。色谱分离法在化合物的分离中应用较为广泛，且色谱纯度、回收率和分离效率等方面远远优于传统的制备方法，其中色谱纯度通过面积归一化法得到。

1 仪器与试药1.1 仪 器U3000高效液相色谱仪，赛默飞Thermo公司。2 实 验2.1 HPLC(高效液相色谱)法测定B0纽莫康定B0检测方法：Thermo Hypersil GOLD C18，4.6 mm250 mm， 5 m; 以V(乙腈)∶V(水)=45∶55为流动相，等度洗脱。

纽莫康定B0对照品溶液的配制：取纽莫康定B0对照品约20 mg， 精密称定，置于50 mL容量瓶中，加乙醇超声溶解后，稀释至刻度，摇匀，制得质量浓度为400 mg/L的纽莫康定B0对照品溶液。纽莫康定B0的结构式为2.2 HPLC(高效液相色谱)法测定C0检测方法为公司自行开发，线性梯度洗脱程序如表1所示。纽莫康定B0(Pneumocandin B0)是棘白菌素类化合物，其半合成衍生物卡泊芬净(Caspofungin)已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的患者的侵袭性曲霉病。笔者以实验室制得的纽莫康定B0粗品为原料，通过高压制备对纽莫康定B0进行了放大中试研究，开发出了一种生产周期短、成本低和色谱纯度高的制备工艺。1.2 试 药工业级二氯甲烷，山东金岭化工股份有限公司。纽莫康定C0的结构式为声明：本文所用图片、文字来源《发酵科技》，版权归原作者所有。

Welch Ultimate HILIC Amide柱，4.6 mm250 mm， 3.5 m; 波长220 nm， 流量1.0 mL/min， 进样量10 L，柱温40 ℃，流动相A为水，流动相B为乙腈。作为合成真菌药物卡泊芬净的中间体，纽莫康定B0由真菌Zalerion arboricola发酵产生，发酵过程中会产生与纽莫康定B0结构相近的副产物及大量的色素。

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供试品溶液配制：对制备液用氮气吹干，加乙醇振摇使溶解并稀释至质量浓度约1 000 mg/L，摇匀，用0.22 m有机滤头过滤。由于C0为B0生产过程中的关键杂质，在生产纯化过程中去除C0有一定的难度。

工业甲醇，兖矿国宏化工有限责任公司。按照结构中脯氨酸上取代基的不同主要分为A0，B0和C0，其中B0，C0分别为同分异构体。Cs-prep150工业制备色谱系统，汉邦科技。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：脯氨酸，卡泊芬净，二氯甲烷。

因此，开发出一种有效的方法得到高纯度的纽莫康定B0对于后续合成卡泊芬净尤为重要。检测波长210 nm， 柱温40 ℃，进样量10 L，流量1 mL/min， 运行时间45 min。

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纽莫康定C0的结构式为声明：本文所用图片、文字来源《发酵科技》，版权归原作者所有。供试品溶液配制：对制备液用氮气吹干，加乙醇振摇使溶解并稀释至质量浓度约1 000 mg/L，摇匀，用0.22 m有机滤头过滤。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：脯氨酸，卡泊芬净，二氯甲烷。纽莫康定B0(Pneumocandin B0)是棘白菌素类化合物，其半合成衍生物卡泊芬净(Caspofungin)已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的患者的侵袭性曲霉病。

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